NGS工作流程可以分為這三步
更新時(shí)間：2021-11-18 點(diǎn)擊次數(shù)：3973
NGS工作流程通常從樣品制備步驟開(kāi)始，其成功與否對(duì)確保可靠的測(cè)序結(jié)果至關(guān)重要。為了獲得足夠數(shù)量和質(zhì)量的核酸，需要對(duì)樣品進(jìn)行有效和均勻的研磨。機(jī)械裂解，更具體地說(shuō)是珠磨式技術(shù)，被認(rèn)為是樣品研磨均勻化的黃金標(biāo)準(zhǔn)。
NGS工作流程可以分為這三步：
文庫(kù)制備：為了節(jié)省資源，可以將多個(gè)文庫(kù)混合在一起，在同一運(yùn)行中進(jìn)行測(cè)序——該過(guò)程稱為多重分析。接頭連接過(guò)程中，標(biāo)簽序列（或說(shuō)“條形碼”）會(huì)添加到每個(gè)文庫(kù)。這些條形碼可以在數(shù)據(jù)分析過(guò)程中區(qū)分文庫(kù)。這步是為獲取足夠量的/目的的/前期適合上機(jī)測(cè)序而標(biāo)準(zhǔn)處理DNA。其程序主要有：片段化，連接，擴(kuò)增。
測(cè)序：在邊合成邊測(cè)序（SBS）過(guò)程中，化學(xué)修飾的核苷酸會(huì)通過(guò)天然的互補(bǔ)性與DNA模板鏈結(jié)合。每個(gè)核苷酸都有一個(gè)熒光標(biāo)記和一個(gè)可逆終止子，后者可以阻止下一個(gè)堿基的摻入。熒光信號(hào)可以指示出加入的核苷酸種類，終止子被切割后，下一個(gè)堿基才可以繼續(xù)結(jié)合。其實(shí)就是把把采集到的樣品分離提純成需要的基因組DNA，再把這些DNA打成小片段，然后再在這些DNA小片段兩頭接上識(shí)別標(biāo)記和測(cè)序接頭，最后再通過(guò)基因捕獲技術(shù)篩選出目的DNA，根據(jù)需求PCR擴(kuò)增。然后，就可以上機(jī)測(cè)序了。上機(jī)測(cè)序的過(guò)程就是讀取這些。
數(shù)據(jù)分析：可以使用直觀的數(shù)據(jù)分析應(yīng)用程序來(lái)分析NGS數(shù)據(jù)，無(wú)需進(jìn)行生物信息學(xué)培訓(xùn)或另外雇傭?qū)嶒?yàn)室人員。這些工具可以進(jìn)行序列比對(duì)、變異檢出、數(shù)據(jù)可視化或解讀。
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