RNA HS Assay Kit的工作原理可以通過熒光染料選擇性結(jié)合、熒光信號(hào)的產(chǎn)生和處理、耐受性與特異性等方面來理解。以下是對(duì)工作原理的具體分析：
1.熒光染料選擇性結(jié)合：
Kit使用特定的熒光染料，這些染料具有高度選擇性，僅在與RNA結(jié)合時(shí)才會(huì)發(fā)出熒光信號(hào)。這種選擇性結(jié)合確保了該試劑盒能夠準(zhǔn)確區(qū)分RNA和其他核酸，如DNA。
當(dāng)熒光染料與RNA結(jié)合時(shí)，它會(huì)經(jīng)歷一個(gè)熒光性質(zhì)的變化，即熒光增強(qiáng)。這種特性使得檢測(cè)變得非常靈敏，即使是低豐度的RNA樣品也能被準(zhǔn)確檢測(cè)到。
2.熒光信號(hào)的產(chǎn)生和處理：
一旦熒光染料與RNA結(jié)合，就會(huì)發(fā)出熒光信號(hào)。這些信號(hào)通過Qubit熒光計(jì)或兼容的熒光檢測(cè)設(shè)備讀取，并轉(zhuǎn)化為RNA濃度的數(shù)值。
Qubit儀器會(huì)計(jì)算熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并將其與預(yù)先設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，從而得到RNA的精確濃度。此過程僅需約2分鐘即可完成，顯著提高了實(shí)驗(yàn)效率。
3.耐受性與特異性：
RNA HS Assay Kit設(shè)計(jì)時(shí)考慮了實(shí)驗(yàn)中可能遇到的各種污染物，如鹽、溶劑、去污劑等。該試劑盒對(duì)這些污染物具有出色的耐受性，不會(huì)影響RNA的定量結(jié)果。
試劑盒中的熒光染料不僅與RNA特異結(jié)合，而且還能區(qū)分DNA和RNA。這一點(diǎn)對(duì)于需要準(zhǔn)確RNA定量的下游應(yīng)用尤其重要，如cDNA合成和RT-qPCR實(shí)驗(yàn)。
4.靈敏度與動(dòng)態(tài)范圍：
該試劑盒能夠精準(zhǔn)定量低至250 pg/μL的RNA樣品，檢測(cè)范圍從250 pg/μL到100 ng/μL。這使得它非常適合于低豐度RNA樣本的分析。
相比傳統(tǒng)的紫外吸收法，Qubit RNA HS Assay提供了更高的檢測(cè)靈敏度和更寬的定量范圍，可以顯著降低背景噪音，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)稀釋樣品的準(zhǔn)確測(cè)量。
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