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詳細介紹
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技術原理
蛋白質是生命活動的主要承擔者，翻譯調控又是細胞內重要的調控方式。翻譯是核糖體讀取mRNA模板來指導蛋白質合成的過程，是基因表達的關鍵步驟。翻譯的過程受到嚴格的調控，很多疾病與翻譯異常相關，比如神經退行性疾病、貧血癥和發育障礙等。雖然核糖體的結構與功能研究的比較透徹，但是對于翻譯過程的調控機理還需要深入研究。
核糖體印跡測序(Ribosome profiling, Ribo-seq)，能夠詳細檢測體內的翻譯狀態。Ribo-seq的技術核心是識別與核糖體結合的mRNA以及正在被翻譯的約30個核苷酸。對核糖體結合的mRNA片段進行測序，能夠精確記錄核糖體在翻譯過程中的位置。將轉錄組與Ribo-seq數據聯合分析，可以計算出蛋白質的合成速率。
技術特點
Ribo-seq能夠揭示蛋白合成的時間、地點、位置、哪些蛋白質正在被合成以及蛋白質合成的調控機制。Ribo-seq搭建了從轉錄組學到蛋白質組學之間的橋梁，已經廣泛應用在動物、植物和微生物的研究中，用于揭示生長發育、形態建成、疾病發生、逆境脅迫響應的調控機制。
應用方向
Ribo-seq應用于研究轉錄本的翻譯活性、鑒定翻譯起始位點、ORF位置和蛋白質的翻譯調控機制。
Ribo-seq技術已經廣泛應用在動物、植物和微生物的研究中，用于揭示生長發育、形態建成、疾病發生、逆境脅迫響應的調控機制。總之，Ribo-seq能從基因組水平檢測蛋白質的翻譯狀況，獲得正在翻譯的mRNA序列信息并解析翻譯調控機制。
藍景科信優勢
實驗周期快、質量高、結果穩定可靠。
豐富的物種經驗。
實驗流程
分析內容
標準生信分析
（1）原始數據過濾與測序質量評估
（2）比對去除核糖體RNA、tRNA、sRNA等
（3）Reads長度分布統計與長度過濾
（4）比對參考基因組
（5）測序飽和度分析
（6）RF在基因組上的分布統計與分類
（7）三堿基節律分析
（8）翻譯基因統計與表達量分析
（9）樣本關系分析
（10）組間差異翻譯基因分析
（11）差異翻譯基因的GO和KEGG功能富集分析
Ribo-seq與RNA-seq的聯合分析
（1）翻譯效率計算
（2）Ribo-seq與RNA-seq的相關性分析
（3）翻譯效率與轉錄水平的關聯分析
分析流程
實驗案例
送樣要求
（1）細胞樣本：建議送樣量5×106-1×107個。
（2）動物組織樣本：建議送樣量≥300 mg。
（3）植物組織樣本：建議送樣量≥500 mg。
樣本分組
至少2組樣品，包括對照組和實驗組，樣本數建議：3 Vs 3。
參考文獻
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Ingolia NT, Brar GA, Rouskin S, McGeachy AM, Weissman JS. The ribosome profiling strategy for monitoring translation in vivo by deep sequencing of ribosome-protected mRNA fragments. Nat Protoc. 2012. 7(8):1534-1550.
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